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脱细胞纤维环基质作为组织工程纤维环支架的可行性研究

发布日期:2014-6-12 15:22:59 浏览次数: 1711次

  目的:对天然纤维环组织进行脱细胞处理,探讨脱细胞纤维环基质作为组织工程纤维环支架的可行性。

  方法:取新鲜猪尾纤维环组织,先放入Tris-HCl低渗缓冲液中浸泡48h,再用含3% TritonX-100的Tris缓冲液脱细胞处理72h,接着用含DNase Ⅰ和RNase A的缓冲液处理24h,去离子水冲洗干净。HE染色观察脱细胞纤维环基质的细胞去除情况及大体结构;甲苯胺蓝染色和番红O染色观察细胞外基质GAG和胶原的保留情况;Hoechst 33258染色观察有无细胞及细胞碎屑残留;羟脯氨酸试剂盒测定胶原含量、DMMB法测定GAG含量,与天然纤维环进行对比;电镜观察脱细胞过程对纤维环组织的超微结构有无影响;测定脱细胞纤维环基质的拉伸弹性模量,并与天然纤维环进行对比。

  结果:HE染色可见脱细胞纤维环基质中无细胞残留,胶原排列整齐;甲苯胺蓝染色和番红O染色呈强阳性,说明GAG和胶原保留良好;Hoechst 33258染色无细胞及细胞碎屑残留;胶原含量为(150.83±2.43)μg/mg,与天然纤维环胶原含量(143.99±4.86)μg/mg相比无统计学差异;GAG含量为(41.07±2.54)μg/mg,比天然纤维环GAG含量(54.01±2.84)μg/mg稍低;电镜可见脱细胞过程对标本的超微结构无影响;脱细胞纤维环基质的拉伸弹性模量为(29.73±4.17)MPa,天然纤维环为(30.94±4.28)MPa,两者相比无统计学差异。

  结论:脱细胞纤维环基质中无细胞及细胞碎屑残留,细胞外基质胶原及GAG保留良好,超微结构无破坏,力学性能保留良好,有望成为一种理想的组织工程纤维环支架。